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EvaGreen qPCR 染料

适于qPCR 和 HRM 最佳（没有之一）荧光染料

     EvaGreen 是一种用于实时定量 PCR （ qPCR ）的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性， EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。

    首先， EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时， EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号（图 3）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 4 ）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。

    第二， EvaGreen 的稳定性极好。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反， SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。

    EvaGreen 降低了细胞膜透性，因而比 SYBR Green 1 更加安全。独立实验室的测试结果显示， EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性 。相反，虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制，使其有诱变增强作用 。考虑到 PCR 的广泛使用，其安全性应该得到足够重视。

图3. 比较Biotium公司的 Fast EvaGreen master mix (green)和 A公司 (blue) 和 Q公司 (red)fast SYBR Green master mixes, 显示相比 SYBR Green，EvaGreen 有着超级灵明度。 （ A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.）		图 4 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析可以明显的区分三个不同的基因型：突变型（红色）、杂合型（紫色）和野生型（蓝色）。（数据由 Corbett Research 提供）
		图 5 . EvaGreen 在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱

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