图1：PMA 是一种不具有细胞膜透性的染料，因此其仅能够选择性的共价修饰不具有完整细胞膜的死细菌的DNA， 而不能修饰细胞膜完整的活细菌中的DNA。由于经PMA修饰的DNA不能被扩增，因此可以通过裂解活细胞并对其中DNA进行qPCR，从而实现对活性菌的定量检测。
如何能够高效灵敏的检测死细菌中存在的活细菌数量在实际应用中至关重要，包括食品安全检查，饮用水质量控制和药物诊断等。而传统使用的细菌培养的检测方法，既费时又不够灵敏。
以PCR为基础的替代检测方法具有快速和高灵敏度特点。然而，基于 PCR的检测方法并不能有效的将活细胞和死细胞区分开来。近年来，Biotium公司研发的新型DNA修饰染料-叠氮碘化丙锭 (PMA™) 成功的克服了该难题。只需在进行PCR检测前使用PMA预处理细菌样本，就能够选择性的检测活细菌，此方法敏感性高，检测结果可靠。
PMA™ 是一种与DNA具有高度亲和性的光反应染料。该染料可以嵌入在双链DNA中，当暴露在强烈的可见光下时可以与DNA形成共价连接，从而实现对DNA的化学修饰。而经修饰后的DNA将不能通过PCR进行扩增 (Figure 1)。 由于PMA™ 被设计为不能被细胞膜穿透性，因此当使用该染料处理同时包含死细菌和活性菌的样品时，只有细胞膜结构受到破坏的死细菌中的DNA能够被化学修饰。接下来可以进一步裂解活性菌并进行qPCR检测，从而实现对活性菌的选择性检测。同时，PMA™-PCR技术不仅能够应用于细菌检测，同样也可以用于其他微生物的检测（详见PMA™ 应用列表）。
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图2(A)：大肠杆菌PMA™-qPCR扩增曲线图。未经处理和经过热激灭活的大肠杆菌分别使用PMA染料进行预处理，然后进行qPCR检测。 qPCR 使用16S rRNA 引物。 |
图2(B)：活、死大肠杆菌经PMA™处理和未经PMA™处理后的ΔCt值。(ΔCt = Ct with PMA™ – Ct without PMA™). |
图3: PMAxx™ 和PMA™ 在检测死细菌和活性菌中的区别。
PMAxx™作为PMA™的替代升级产品，具有更高的灵敏性。尽管PMA能够通过qPCR有效的区分死细菌和活性菌，但并不能够完全排除来自死细胞DNA的PCR产物，从而带来潜在的假阳性结果。作为Biotium公司的新型染料，PMAxx™能够更加高效的抑制死细胞中DNA的PCR扩增，从而更好的区分死细菌和活性菌。
Download the PMA™ and PMAxx™ flyer to learn more.
图4：经温和热激（56℃ 3小时）灭活的大肠杆菌进行PMA™或 PMA™+Enhancer处理，用PMA-Lite光分解后提取DNA。随后使用Fast EvaGreen® qPCR Master Mix扩增大肠杆菌DNA中377-bp片段。qPCR结果表明与PMA™单独处理的死细胞相比，PMA™+Enhancer处理过的死细胞扩增Ct明显延迟，而只使用Enhancer处理则对样品PCR没有影响。
PMA™ Enhancer能够有效地改善通过PMA™来区分革兰氏阴性菌中死细菌和活性菌。我们提供的PMA™ Enhancer为5倍浓缩液，可在使用PMA™之前添加到样品中。当对经过Enhancer预处理过的革兰氏阴性菌中的 进行PCR检测时，样品中死细胞的信号明显减弱，而活细胞的信号则没有变化。PMA™ Enhancer也可以与PMAxx™作为搭配使用。因此，同时使用PMA™ 和PMA™ Enhancer可以有效的对革兰氏阴性菌进行viability PCR检测。 PMA™ Enhancer作为一个独立的产品提供。另外，在PMA Bacterial Viability Kits（革兰氏阴性菌专用）中也包含该产品。
PMA™-PCR试剂盒可以用来通过使用PMA™染料和qPCR选择性的检测特定菌群中活细菌。试剂盒包含PMA™或PMAxx™染料，Fast EvaGreen qPCR Master Mix和经过验证的PCR引物，可以用于检测食品安全，公共卫生和 抗菌研究广泛关注的特定菌株。
试剂盒包含：
• PMA™或PMAxx™染料
• Fast EvaGreen qPCR Master Mix
• ROX 校正染料
• PMA Enhancer（仅适用于革兰氏阴性菌）
• 特定菌株经验证的PCR引物
PMA Real-Time PCR 细菌活力检测试剂盒适用于:
- • 沙门氏菌
- • 结核分歧杆菌
- • 金黄色葡萄球菌
- • 金黄色葡萄球菌（耐甲氧西林）
- • 李斯特菌
- • 大肠杆菌
- • 大肠杆菌 O157:H7
- • 嗜肺军团菌
更多详情请下载 PMA Real-Time PCR Kits.
Biotium 公司提供的PMA-Lite™ LED 光分解仪， 可以用来对PMA及其他光反应染料进行控制时间和温度的光处理。
图5：PMA-Lite™ LED Photolysis Device.产品特性:
- • 可以同时为18个小离心管样品提供均匀照明；
- • 内置风扇能够保持温度低于37℃；
- • 四种照明时间的选择（10，15，20 ，30 分钟）；
- • 配备长寿命的LEDs 灯（465-475 nm）；
- • 能够有效激活PMA™，EMA 或其他类似染料。
订货信息：
| 编号 | 产品名称/规格 | 价格（rmb） |
生产商 |
| 40013 | PMA 1MG |
￥1848 | Biotium Inc. |
| 31038 | PMA Enhancer for Gram Negative Bacteria, 5X Solution 16ml |
￥1036 | Biotium Inc. |
| 31050 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli (uidA) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31050-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli (uidA) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31037 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli O157:H7 (Z3276) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31037-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli O157:H7 (Z3276) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31053 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Legionella pneumophila (mip) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31051 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Listeria monocytogenes (hly) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31051-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Listeria monocytogenes (hly) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31034 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Mycobacterium tuberculosis (groEL2) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31033 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Salmonella enterica (invA) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31033-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Salmonella enterica (invA) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31036 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Staphylococcus aureus (mecA) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31035 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Staphylococcus aureus (nuc) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 40019 | PMA, 20mm in h2o 100uL |
￥1778 | Biotium Inc. |
| E90002 | PMA-Lite LED Photolysis Device 1EA |
￥27202 | Biotium Inc. |
| 40069 | PMAxx, 20mM in H2O 100uL |
￥1778 | Biotium Inc. |