NucView Caspase-3 底物

双功能荧光底物实现活细胞 Caspase-3 活性检测并同时染色细胞核DNA

特点:

  • 在活细胞中检测Caspase-3并染色细胞核DNA
  • 直接加入细胞培液,孵育15-30分钟后即可检测,无需清洗残余染料
  • 兼容使用荧光素滤光片的流式细胞仪和荧光显微镜。
  • 可固定染色
NucView 488-Detecting caspase-3 activity in live cells,caspase-3活性检测,caspase活性检测,caspase-3活性测定,细胞凋亡,细胞程序死亡,活细胞检测

Principle of NucView Caspase-3 Substrate Detection.

DEVD-NucView 488 Caspase-3 底物是Biotium公司开发的一系列在活细胞内实时检测Caspase活性的NucView Caspase 底物中的第一个产品。不同于传统的caspase酶检测方法,Biotium 公司发明了一种创新的荧光底物设计技术,将底物的一部分连接到功能性染料上,从而使这些染料失去功能。利用这种方法设计的荧光底物在酶切之后,染料能被释放出来恢复功能并能结合目标分子释放荧光(图2)。
对于DEVD-NucView 488 Caspase-3底物,Biotium 将一段带有大量负电荷的DEVD肽连接到一种和DNA结合的染料上。这些负电荷使得该染料不能结合DNA,也就不能产生荧光(图6)。这种底物可以快速的穿过细胞膜进入细胞质并在这里被Caspase-3剪切,从而释放出和DNA有高亲和力的染料。释放出来的染料可以迁移进入细胞核并把细胞核染成亮绿色(图1)。因此,这种双功能底物让研究人员在凋亡细胞内检测Caspase-3活性的同时染色细胞核,显示细胞核在凋亡过程中经历的形态学变化。在众多凋亡的细胞内,不同细胞可能处在不同时期并经历着凋亡过程中的不同事件,因而研究中很

重要的一点就是能实时独立的跟踪这些事件,从而更好的了解事件之间的相互关系。DEVD-NucView 488 Caspase-3底物结合Biotium公司开发的其他荧光探针,是通过荧光显微镜和/或者流式细胞仪来研究这些不同事件的时间、空间关系的强有力工具(图4)。

Biotium公司现提供两种活细胞Caspase-3检测试剂盒。产品#30029包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和Caspase-3抑制剂,足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少100次实验。产品#30030是一种双凋亡检测方法试剂盒,包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和用来检测磷酸化丝氨酸(PS)转位的红色荧光sulforhodamine 101-annexin V,足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少50次实验。使用两种产品的具体实验步骤可以从Biotium网站上下载。
 
图4. 在Staurosporine诱导不同凋亡时间(分别为1小时,2.5小时和5小时)后,使用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育Jurkat细胞,并用流式细胞仪检测Jurkat细胞Caspase-3活性。每次分析前,用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物(10μM)孵育诱导后的细胞15分钟。在0时刻(未用Staurosporine诱导作为对照)Caspase-3阳性细胞百分比为0%(红色),1小时为10%(蓝色),2.5小时为80%(紫色),5小时为97%(天蓝色)。   图5. Staurosporine诱导的Hela细胞在37℃下用1μM的DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育30分钟后用通常的3.7%甲醛固定。固定后的细胞破膜并用sulforhodamine 101-phalloidin(Texas Red-phalloidin)(#00033)染色。调亡细胞的细胞核DNA被酶反应释放的染料染成绿色,同时所有细胞被F-actin结合的phalloidin染成红色。


图6. 用稀释在pH7.4 TE缓冲溶液中的dsDNA滴定NucView 488 Caspase-3底物(1μM)和它的酶切产物(1μM)。用荧光酶标仪监测530nm荧光信号(475nm激发)。

订货信息:
编号 产品名称/规格

价格(rmb)

生产商
10402
NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in DMSO    100uL
¥4455 Biotium Inc.
10403
NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in 1X PBS    100uL
¥4455 Biotium Inc.
10405
NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO    100uL
¥4455 Biotium Inc.
10406
NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO    100uL
¥4455 Biotium Inc.
30029
NUCVIEW 488 CASPASE 3 ASSAY KIT    1KIT
¥4875 Biotium Inc.
30030
Dual Apoptosis Assay with NucView 488 caspase-3 substrate and Texas Red-Annexin V (50 - 250 assays)    1KIT
¥4875 Biotium Inc.
30062
NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Assay Kit (100 assays)    1KIT
¥4875 Biotium Inc.
30067
Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF594 Annexin V (50 assays)    1KIT
¥4875 Biotium Inc.
30072
NucView 488 and RedDot 2 Apoptosis & Necrosis Kit (100 assays)    1KIT
¥4275 Biotium Inc.
30073
Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF640R-Annexin V (50 assays)    1KIT
¥4875 Biotium Inc.
10405-T
NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO, Trial Size    10uL
¥900 Biotium Inc.
10406-T
NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO, Trial Size    10uL
¥900 Biotium Inc.
30029-T
NUCVIEW 488 CASPASE 3 ASSAY KIT, TRIAL SIZE    1ST
¥1320 Biotium Inc.